瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常見誤區(qū)

　　誤區(qū)一：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染目的基因會(huì)整合到染色體，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不會(huì)
 

　　這個(gè)答案是否定的，因?yàn)闊o論是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，DNA都會(huì)被引入細(xì)胞核并以一定的概率隨機(jī)地整合到宿主染色體；差別在于，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所使用的質(zhì)粒含有抗性基因，隨后通過藥物篩選，將未轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞消除，留下的則是成功轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞，因此經(jīng)過一段時(shí)間的藥物篩選，留存下來的細(xì)胞都是能夠穩(wěn)定傳遞的細(xì)胞，稱之為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；而瞬時(shí)轉(zhuǎn)染由于缺乏藥物壓力篩選，再加上只有少量細(xì)胞中有目的基因整合到染色體，因此在傳代過程中，陽性細(xì)胞會(huì)逐漸減少，導(dǎo)致表達(dá)量逐漸降低，最終無法長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)。
 

　　誤區(qū)二：只有慢病毒感染才能構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
 

　　可以用來進(jìn)行快速轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染方法，同樣適用于構(gòu)建穩(wěn)定的細(xì)胞株，例如電穿孔法、化學(xué)試劑轉(zhuǎn)染和慢病毒感染等。只是這三種轉(zhuǎn)染方法在具體應(yīng)用上可能會(huì)有一些差異。需要特別注意的是，在進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)染時(shí)，由于RNA不需要進(jìn)入細(xì)胞核，因此通常只用于短期轉(zhuǎn)染表達(dá)。
 

　　誤區(qū)三：構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株費(fèi)時(shí)費(fèi)力，周期長(zhǎng)，不確定性高，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室不方便構(gòu)建
 

　　細(xì)胞株構(gòu)建需要通過藥物加壓篩選，與瞬轉(zhuǎn)相比周期長(zhǎng)，但在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，確定了一個(gè)長(zhǎng)期研究的靶標(biāo)，后續(xù)都會(huì)針對(duì)某一基因進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，那么這個(gè)時(shí)候構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株就顯得尤為必要，畢竟細(xì)胞株相較于瞬轉(zhuǎn)來說，最大的優(yōu)點(diǎn)就是表達(dá)穩(wěn)定性高，批間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性更高。
 

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