Wako質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶概述

Wako的質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lysyl Endopeptidase®, MS Grade，貨號 125-05061）是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中用于質(zhì)譜樣品前處理的一款核心工具酶。它的特點是特異性高、性能穩(wěn)定，特別適合與胰蛋白酶聯(lián)用以提升蛋白鑒定覆蓋率。

一、 Wako的質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶核心信息一覽

二、Wako的質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶產(chǎn)品特性與應(yīng)用優(yōu)勢

這款酶之所以在質(zhì)譜分析中表現(xiàn)出色，主要源于以下幾個關(guān)鍵技術(shù)優(yōu)勢：

1. ji致的切割特異性：它特異性水解賴氨酸（Lys）殘基C末端的肽鍵。與同時切割賴氨酸和精氨酸的胰蛋白酶相比，它的酶切產(chǎn)物通常是更長的肽段，這在某些蛋白測序中具有獨特-價值。

2. 與胰蛋白酶聯(lián)用，實現(xiàn)“金標(biāo)準(zhǔn)"酶切方案：這是它最核心的應(yīng)用場景。先使用Lys-C在含尿素的變性條件下進(jìn)行第1步切割，稀釋后再用胰蛋白酶進(jìn)行第二步切割。這種組合策略能顯著提高酶解效率，尤其是對膜蛋白等難溶蛋白，可大幅提升肽段鑒定數(shù)量和序列覆蓋率。

 3. 出色的穩(wěn)定性與兼容性：該酶活性不受4M尿素或0.1% SDS等常見變性劑的影響，這意味著它可以適應(yīng)復(fù)雜的樣品處理條件。在pH 5.0-12.0范圍內(nèi)穩(wěn)定，zui適反應(yīng)pH為 9.0-9.5。

4. 顯著提升質(zhì)譜數(shù)據(jù)質(zhì)量：實驗數(shù)據(jù)表明，與單獨使用胰蛋白酶相比，Lys-C與胰蛋白酶聯(lián)用可以將漏切位點比例從8%降至3%，同時鑒定出的多肽數(shù)量從17個增加到22個，有效提高蛋白測序的覆蓋度。

三、Wako的質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶使用要點

溶解：使用前，將一支（20 µg）凍干粉溶解于 1 mL 的 2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液 (pH 8) 中，輕輕混勻即可。

儲存：必須在 -20°C 條件下，避光保存，以保持其活性穩(wěn)定。

參考用法（膠內(nèi)酶切）：凝膠片段經(jīng)脫色、還原烷基化、脫水干燥后，用含Lys-C的緩沖液（如50 mmol/L Tris-HCl, pH 8.5）在冰上充分溶脹，隨后在 37°C 下酶切過夜，最后抽提肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析。

四、Wako的質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶注意事項

該產(chǎn)品僅用于研究目的，不可用于人體或臨床診斷。

其來源菌株水解無色桿菌根據(jù)新的分類學(xué)被鑒定為產(chǎn)酶溶桿菌，這并不影響產(chǎn)品性能。

使用時需注意其抑制劑，如DFP、PMSF、TLCK等，避免在溶液中加入這些物質(zhì)。

你是計劃用它來做膠內(nèi)酶切還是溶液內(nèi)酶切？不同的實驗流程在步驟上會有些差異，可以告訴我你的具體應(yīng)用，技術(shù)人員可以幫你整理更詳細(xì)的操作步驟。

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