Polyplus jetPRIME® 轉染試劑標準操作步驟

更新時間：2025-07-01

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以下是 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑的標準操作步驟（適用于貼壁細胞），操作前請確認細胞狀態、核酸純度及實驗條件適配性。

一、試劑準備

試劑名稱	要求
jetPRIME®	使用前平衡至室溫，輕渦旋混勻（勿劇烈震蕩）
核酸（DNA/siRNA）	高純度（OD<sub>260/280</sub>≈1.8-2.0），無菌無內毒素，溶于無菌水或TE緩沖液
jetPRIME® Buffer	提供無菌緩沖液（若試劑盒內含）
細胞培養基	含血清 & 抗生素（轉染全程無需更換無血清培養基）

二、 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑操作流程（24孔板為例）

Day 0: 細胞鋪板

1. 細胞計數：消化對數生長期細胞，調整密度。

2. 鋪板：

- 每孔加入 0.5~1×10? cells（貼壁細胞）

- 用 500μL wan-quan培養基（含10%血清+抗生素）培養。

- 關鍵：轉染時細胞密度需達 70~90% 匯合度（過度生長降低效率）。

Day 1: 轉染（耗時<15分鐘）

> ?? 所有步驟在無菌環境（超凈臺）操作，試劑室溫平衡。

步驟	操作
1. 稀釋核酸	取 1μg DNA（或 1.5~5nM siRNA）加入 200μL jetPRIME Buffer 中，輕混勻（如無Buffer可用無菌Opti-MEM替代）。
2. 加轉染試劑	向稀釋核酸中加入 2μL jetPRIME®（DNA:jetPRIME = 1μg:2μL）。
3. 混合孵育	立即渦旋10秒 → 室溫靜置10分鐘（溶液變渾濁屬正?，F象）。
4. 加入細胞	將混合液逐滴加入細胞孔，輕搖培養板混勻。
5. 繼續培養	放回37℃ CO<sub>2</sub>培養箱，無需更換培養基。

三、關鍵優化參數

四、懸浮細胞轉染步驟

若轉染懸浮細胞（如Jurkat、THP-1）：

1. 離心收集細胞 → 重懸于新鮮培養基（密度 0.5~1×10? cells/mL）。

2. 按 1mL細胞懸液 + 混合液（1μg DNA + 2μL jetPRIME）加入EP管。

3. 輕柔混勻 → 37℃靜置 15~30分鐘 → 轉移至培養板繼續培養。

五、 Polyplus jetPRIME® 轉染試劑使用注意事項

1. 細胞狀態：僅用健康、低傳代細胞（傳代<30）。

2. 試劑保存：jetPRIME® 4℃避光保存（非-20℃），保質期內穩定。

3. 避免污染：核酸和Buffer嚴格無菌操作。

4. 毒性處理：若細胞死亡率高：

- ↓ 降低jetPRIME用量（如1μg DNA用1.5μL試劑）

- ↓ 縮短轉染后培養時間（24h后換液）。

5. 對照設置：必設空載體對照組 + 未轉染組。

六、Polyplus jetPRIME® 轉染試劑替代方案（特殊情況）

問題排查：若效率低 → 檢查核酸純度、細胞密度、試劑比例；或聯系 polyplus代理——天津益元利康生物科技有限公司獲取技術支持。