感受態(tài)細(xì)胞制備原理與舉例

一、感受態(tài)細(xì)胞

即受體細(xì)胞通過(guò)理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來(lái)DNA的生理狀態(tài)的細(xì)胞。

二、感受態(tài)細(xì)胞制備原理

將快速生長(zhǎng)的大腸桿菌置于經(jīng)低溫0℃預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會(huì)造成細(xì)胞膨脹（滲透作用），同時(shí)，Ca2+會(huì)使細(xì)胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細(xì)胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開(kāi)來(lái)，離開(kāi)所在區(qū)域，誘導(dǎo)細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞。

大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞

三、大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)步驟一

從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加入至合適的LB液體培養(yǎng)基中，在LB固體培養(yǎng)基進(jìn)行涂板處理，置于37℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)步驟二

次日，從LB固體培養(yǎng)基上挑取濕潤(rùn)，圓滑的大腸桿菌單菌落，接種于無(wú)抗生素的5ml LB液體培養(yǎng)基中，37℃下振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。將該菌懸液以1:100～1:50的比例接種于100ml LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)2-3h至OD600＝0.3-0.5左右。（注：此步必要時(shí)可在顯微鏡下鏡檢菌細(xì)胞是否形態(tài)一致，有無(wú)雜菌污染。）

實(shí)驗(yàn)步驟三

在無(wú)菌條件下將菌液轉(zhuǎn)移到冰上預(yù)冷的離心管中，冰上放置10-30min，使培養(yǎng)物冷卻至0℃，然后4℃，4000rpm/min離心10min；

實(shí)驗(yàn)步驟四

棄掉上清，倒置1 min，以便將培養(yǎng)液流盡；

實(shí)驗(yàn)步驟五

用冰預(yù)冷的0.1 mol/L的CaCl2溶液10 ml輕輕懸浮細(xì)胞，充分混勻，冰上放置30 min后，4℃下4000rpm/min離心10min；

實(shí)驗(yàn)步驟六

棄掉上清，并倒置1 min，以便最后的培養(yǎng)液流盡；

實(shí)驗(yàn)步驟七

加入4 ml預(yù)冷含15%甘油（已滅菌處理）的0.1 mol/L的CaCl2溶液，輕輕懸浮細(xì)胞，冰上放置幾分鐘，即成感受態(tài)細(xì)胞懸液；

實(shí)驗(yàn)步驟八

感受態(tài)細(xì)胞100 μL分裝，標(biāo)記貼標(biāo)簽，貯存于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

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