ELISA實(shí)驗(yàn)三類樣本的處理方法

　　用于ELISA實(shí)驗(yàn)的樣本有多種類型，包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法存在差異。合適的樣本預(yù)處理，是確保ELISA實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的第一步。下面讓我們一起來(lái)看看ELISA實(shí)驗(yàn)三類樣本的處理方法吧！
 

　　一、液體樣本
 

　　1. 血清
 

　　血清是ELISA實(shí)驗(yàn)常用的樣本，其預(yù)處理也十分簡(jiǎn)單。使用無(wú)熱原無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室內(nèi)溫度下放置自然凝固(視室溫環(huán)境10分鐘到2小時(shí)不等)或4℃過(guò)夜，分離出血清，(建議傾斜試管或離心管以擴(kuò)大液面的橫截面，使血清能更大程度的分離出來(lái)，)，2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘)，仔細(xì)收集上清，立即進(jìn)行測(cè)定，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
 

　　2. 血漿
 

　　應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑，使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi)，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘)，仔細(xì)收集上清液(血漿)，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。保存過(guò)程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)該再次離心。
 

　　二、固體樣本
 

　　1. 組織標(biāo)本
 

　　切割標(biāo)本后，稱取1g組織，加入9ml的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘)，仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè)，其余冷凍備用，保存過(guò)程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨。
 

　　2. 細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
 

　　許多待測(cè)蛋白不是分泌蛋白，而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白，這個(gè)時(shí)候，要先收集細(xì)胞，洗滌干凈，再破碎細(xì)胞，離心取上清。
 

　　三、植物樣本
 

　　1. 標(biāo)本的精采集及保存
 

　　取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本，在液氮中充分研磨；加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20℃過(guò)夜；于4℃，8000rpm，離心1小時(shí)，取上清。
 

　　上清液過(guò)C-18固相萃取柱。具體步驟是：80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開(kāi)樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過(guò)柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈?，保存?zhèn)溆谩?br /> 

　　上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘，然后4℃離心(8000rpm，15分鐘)，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。
 

　　2. 植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測(cè)定(粗提取)
 

　　新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心?；加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液)，請(qǐng)于4℃，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。
 

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