外泌體提取與純化常見(jiàn)方法

外泌體是一種細(xì)胞分泌的微小膜泡，大小為30~150nm的磷脂雙分子結(jié)構(gòu)，可在細(xì)胞間傳遞物質(zhì)和信號(hào)。它在機(jī)體內(nèi)廣泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、腦脊液等各種體液中。那么你知道外泌體提取與純化常見(jiàn)方法有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、差速離心法

差速離心法是最常見(jiàn)的外泌體分離技術(shù)之一。這種方法利用外泌體與其他細(xì)胞器的沉降系數(shù)不同，將細(xì)胞、細(xì)胞碎片以及其他細(xì)胞器等，通過(guò)不同離心速度分離出去，從而得到純凈的外泌體。

該方法的優(yōu)點(diǎn)在于提取方法簡(jiǎn)單，提取過(guò)程中不會(huì)引入其他的標(biāo)記物，適合大劑量的樣品處理。

缺點(diǎn)在于操作繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，操作過(guò)程中需要超高速離心，且由于離心力的因素，可能會(huì)導(dǎo)致外泌體結(jié)構(gòu)破壞從而對(duì)下游實(shí)驗(yàn)造成影響，對(duì)于一些具有高粘度的生物樣品（例如血漿和血清樣本），則需要更長(zhǎng)的超速離心步驟和更高的離心速度。

二、密度梯度離心法

該方法將超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合，利用外泌體1.13g/ml-1.21g/ml的密度范圍，實(shí)現(xiàn)外泌體與非囊泡顆粒（如蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)/RNA聚集體等）進(jìn)行分離，從而能夠提取含量低的外泌體。

2018年Li K等人改良了此方案，使用碘克沙醇作為新的一種高效介質(zhì)，外泌體回收率更高、純度更高，并且結(jié)構(gòu)和功能保持更好。

三、聚合物沉降法

這種方法是通過(guò)高分子的疏水聚合物（如聚乙二醇（PEG））可以改變外泌體溶解性和分散性的特點(diǎn)，使其能夠在比較低的離心力下沉降出來(lái)。其原理可能與疏水聚合物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子以及疏水聚合物本身形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)。

聚合物沉降法的優(yōu)點(diǎn)在于操作起來(lái)較為簡(jiǎn)單，不需要超速離心機(jī)，得到的外泌體數(shù)量較多，對(duì)外泌體理化性質(zhì)影響較小。

然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（如脂蛋白等），從而對(duì)下游分析造成一定影響。

四、超濾法

這種方法是將溶劑及小分子物質(zhì)過(guò)濾到膜的另一側(cè)，而將相對(duì)大分子物質(zhì)截留在超濾膜上，以達(dá)到分離的目的。外泌體直徑范圍30～150 nm，利用超濾膜經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的低速離心就可以分離樣本中的外泌體。

超濾法的優(yōu)點(diǎn)是操作方便，富集效率比較高，易于搭配其他膜或操作，并且成本較低。

缺點(diǎn)在于過(guò)膜易損耗變形，導(dǎo)致膜堵塞，純度較低，大顆粒蛋白污染嚴(yán)重，并且在洗脫過(guò)程中，附著于膜上的外泌體難以回收，導(dǎo)致提取損失。

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