影響轉染效率的因素及注意事項有什么？

細胞轉染是指將外源遺傳物質（DNA或RNA）導入真核細胞的技術。 細胞轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染。那么你知道影響轉染效率的因素及注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、轉染試劑

不同細胞系轉染效率通常不同，因此在轉染實驗前需要根據(jù)細胞特性選擇合適的轉染試劑。可以通過已發(fā)表文獻和轉染試劑提供的已成功轉染的細胞株來進行選擇。

二、細胞狀態(tài)

轉染前細胞活力和總體健康狀況是轉染產(chǎn)生變異性的重要來源。一般建議在轉染前至少24小時進行傳代培養(yǎng)，以確保細胞在傳代后處于轉染的最佳生理條件，細胞活力大于 90%。最shi合轉染的細胞是復蘇經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉染。為確保轉染的重復性，一般選擇低細胞代次（<30，能確保基因型不變）。如果發(fā)現(xiàn)同一株細胞轉染效率降低，可以嘗試重新復蘇細胞以恢復最佳結果。此外，污染會嚴重影響轉染結果。

匯合度：轉染時過高或者過低的細胞密度會導致轉染效率降低，乃至表達水平偏低。因此要根據(jù)具體的細胞類型、應用和轉染技術，來優(yōu)化確定相應的最佳密度。如使用陽離子脂質體轉染時，貼壁細胞一般達到 70%-90% 的匯合度，懸浮細胞達到 5 ×10⁵ 至 2 ×10⁶ 個細胞/mL 的密度，即可獲得良好的結果。但不同的轉染試劑，針對不同細胞系要求轉染時的最適細胞密度各不相同，因此使用新的細胞系或者新的轉染試劑時，應進行實驗優(yōu)化并建立一個穩(wěn)定方法，包括適當?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時間等等。不同實驗目的也會影響轉染時的鋪板密度，比如研究細胞周期相關基因等表達周期長的基因，就需要較低的鋪板密度，所以需要選擇能夠在較低鋪板密度下進行轉染的試劑。

三、培養(yǎng)基

不同的細胞或細胞類型都有非常特定的培養(yǎng)基、血清、補充劑要求，選擇最shi合細胞類型的培養(yǎng)基和轉染方法在轉染實驗中起著非常重要的作用。一些細胞系和原代細胞可能需要特殊的包被材料（如多聚賴氨酸、膠原蛋白、纖連蛋白等）以附著于培養(yǎng)板并獲得最佳的轉染結果。

可參考已發(fā)表文獻或細胞來源處獲得獲得針對特定細胞類型的合適培養(yǎng)基和轉染方法，如果沒有相關信息，則需要根據(jù)經(jīng)驗或篩選實驗確定。

四、血清

一般培養(yǎng)基中存在血清可增強 DNA 轉染。但使用陽離子脂質體轉染時，一些血清蛋白會干擾復合物的形成，因此應在無血清條件下制備DNA-脂質體復合物。當使用 RNA 轉染細胞時，建議在無血清條件下轉染，以避免潛在的RNase污染。

五、抗生素

一般用于瞬時轉染的培養(yǎng)基中可含抗生素。不過，由于陽離子脂質體試劑可增加細胞通透性，因此也可能增加遞送到細胞內(nèi)的抗生素量，從而導致細胞毒性以及較低的轉染效率。因此不建議在轉染培養(yǎng)基中加入抗生素。可在轉染前鋪板細胞時，使用無抗生素的培養(yǎng)基。

對于穩(wěn)定轉染，不應在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些抗生素是 Gibco Geneticin 選擇性抗生素的競爭性抑制劑。在構建穩(wěn)定的細胞系時，在轉染程序后預留 48-72 小時供細胞表達抗性基因，之后再加入選擇性抗生素。

六、轉染分子類型

質粒 DNA 是最chang用的轉染載體。質粒 DNA 的拓撲結構（線性或超螺旋）和大小會影響轉染的效率，超螺旋質粒 DNA 瞬時轉染的效率zui高。在穩(wěn)定轉染中，相對于超螺旋 DNA，雖然使用線性 DNA 會導致細胞的 DNA 攝取量較低，但 DNA 整合到宿主基因組中的效果更優(yōu)。雖然寡核苷酸、RNA、siRNA 和蛋白質等其他大分子也可以轉染到細胞中，但在使用這些大分子時，需要優(yōu)化轉染條件。

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