細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？

你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、細(xì)胞計(jì)數(shù)

將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。

二、制備單細(xì)胞懸液

將收集的細(xì)胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。

三、固定

每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。

四、洗滌

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。

每孔加入100μl細(xì)胞通透劑重懸細(xì)胞，室溫孵育20min。

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。

五、阻斷Fc受體

10-20min。

六、一抗孵育

每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl，2-8℃反應(yīng)30min。

七、洗滌

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。

八、二抗孵育

對(duì)于非熒光染料直標(biāo)抗體，加入100μl熒光二抗重懸，避光2-8℃反應(yīng)30min。對(duì)于直標(biāo)抗體直接跳到步驟九。

九、洗滌

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。

十、上機(jī)分析

用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞，4℃保存，上機(jī)分析。

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