蛋白檢測(cè)條帶的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？如何解決？

你知道在蛋白檢測(cè)中條帶的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？該如何解決嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低或高

①當(dāng)條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低：

原因：目的蛋白經(jīng)過(guò)剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗體檢測(cè)出

解決辦法：樣品準(zhǔn)備時(shí)候要在冰上操作；加入更過(guò)蛋白酶抑制劑；更換別的抗體

②當(dāng)條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期略高：

原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修飾

解決辦法：使用酶去除可能的蛋白修飾；檢查抗原序列

原因2：可能有融合蛋白

解決辦法：查看表達(dá)序列

原因3：蛋白形成二聚體或多聚體

解決辦法：加強(qiáng)變性條件

二、條帶比較模糊

原因：轉(zhuǎn)膜電壓是否過(guò)高；轉(zhuǎn)膜中是否有氣泡殘留；轉(zhuǎn)膜緩沖液組分問(wèn)題

解決辦法：降低轉(zhuǎn)膜電壓，重新配制緩沖液，在電轉(zhuǎn)之前小心的移除膜和膠之間的氣泡

三、條帶分布不均勻

原因：可能孵育時(shí)振蕩不均勻，抗體和封閉液不結(jié)合

解決辦法：離心，分離二抗中的聚合體，確保孵育過(guò)程中膜wan全浸沒(méi)在抗體中；孵育時(shí)確保震蕩均勻，嘗試更換封閉液分離膠聚合不均勻，導(dǎo)致蛋白電泳不一致：調(diào)整聚合條件，分離膠溶液混勻后再進(jìn)行聚合

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