Polyplus轉(zhuǎn)染試劑jetPRIME®產(chǎn)品問答

Q：jetPRIME^®是哪種類型的化合物？

A：jetPRIME^®是由Polyplus-transfection^®公司合成的zhuan利產(chǎn)品，一種新型的基于陽離子聚合物的分子。

Q：使用jetPRIME^®進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，質(zhì)粒是如何導(dǎo)入的？

A：jetPRIME^®和DNA形成帶正電荷的復(fù)合物。這些復(fù)合物通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。隨后經(jīng)質(zhì)子海綿作用，內(nèi)涵體在細(xì)胞質(zhì)中釋放DNA。當(dāng)有絲分裂過程中核膜消失時(shí)，質(zhì)粒大多到達(dá)細(xì)胞核。

Q：我的細(xì)胞比較脆弱，無血清時(shí)不能生長(zhǎng)。我可以嘗試在有血清的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染嗎？

A：與許多其他轉(zhuǎn)染試劑相反，在有血清的環(huán)境下，jetPRIME^®的效率更高。因此，轉(zhuǎn)染復(fù)合物可以直接加到含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞中。

無血清培養(yǎng)基：Opti-MEM培養(yǎng)基（thermo）

Lipo2000,轉(zhuǎn)染時(shí)需要更換培養(yǎng)為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復(fù)合物,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后需要換液。對(duì)細(xì)胞毒性大。

Lipo3000, 轉(zhuǎn)染時(shí)需要更換培養(yǎng)為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復(fù)合物,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后無需換液。跟lipo2000相比，毒性小。

抗生素問題：

jetPRIME^®的轉(zhuǎn)染效率不受抗生素的影響。jetPRIME的常規(guī)批次質(zhì)檢都是在含血清和抗生素的培養(yǎng)基中進(jìn)行的。

細(xì)胞密度問題：

細(xì)胞密度和傳代次數(shù)將影響轉(zhuǎn)染效率。推薦細(xì)胞融合度在60%-80%。對(duì)于使用jetPRIME的轉(zhuǎn)染優(yōu)化條件，請(qǐng)參考jetPRIME^®轉(zhuǎn)染說明書中的Table 1，根據(jù)不同培養(yǎng)板推薦的細(xì)胞數(shù)。此外，如果細(xì)胞已經(jīng)培養(yǎng)很長(zhǎng)時(shí)間（超過20代），建議從液氮中取新的細(xì)胞重新培養(yǎng)。

比值問題：

Q：DNA/jetPRIME^®的比值是什么意思？

A：該比值指的是每微克（ug）DNA相對(duì)應(yīng)的jetPRIME微升數(shù)（uL）。例如，DNA/jetPRIME^®比值為1：2意思是每ug DNA加2uLjetPRIME.

優(yōu)化的問題：

優(yōu)化的第一步是將DNA的量增加1.5倍。推薦增加DNA/jetPRIME^®比值(每ug的DNA，2-3uLjetPRIME^®), 另一種方法是緩慢離心培養(yǎng)板（5min，210g）

擴(kuò)大的問題：

一般來說，DNA的量應(yīng)該和總細(xì)胞數(shù)成比例。參考jetPRIMEprotocol中的推薦，根據(jù)不同規(guī)格的培養(yǎng)皿，所需要的DNA和jetPRIME的量（Table 2）

細(xì)胞特異性問題：

Q：對(duì)于所有細(xì)胞可以使用同樣的條件嗎？

A：已優(yōu)化的操作步驟可用于多種細(xì)胞，例如A549, MCF7,U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。更多細(xì)胞的優(yōu)化條件，請(qǐng)咨詢客服!

HEK-293和HeLa細(xì)胞問題：

Q：HEK-293和HeLa細(xì)胞：是否可以提供使用jetPRIME轉(zhuǎn)染HEK-293和HeLa細(xì)胞的具體建議？

A：jetPRIME對(duì)于DNA轉(zhuǎn)染HEK-293 和HeLa細(xì)胞都是非常高效的。因此，推薦減少DNA的量（例如6孔板，每孔1ug-0.5ug），使用1：2的DNA和jetPRIME比例。

懸浮細(xì)胞問題：

Q：jetPRIME^®推薦用于懸浮細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染嗎？

A：懸浮細(xì)胞，例如T和B淋巴細(xì)胞是眾suo周知的難轉(zhuǎn)染DNA細(xì)胞，無論哪種化學(xué)方法的試劑都很難有較好的轉(zhuǎn)染效率。因此，通常推薦電轉(zhuǎn)或者病毒轉(zhuǎn)染核酸到懸浮細(xì)胞。

植物細(xì)胞問題：

Q：jetPRIME^®是否測(cè)試過可以用于植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染？

A：植物細(xì)胞富含纖維素的膜阻止了jetPRIME/DNA復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。甚至在脫去纖維素的原生質(zhì)體階段，復(fù)合物也無法穿透進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。

HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)問題：

Q：jetPRIME^®對(duì)HUVEC的DNA轉(zhuǎn)染是否有效？

A：對(duì)于HUVEC細(xì)胞，推薦使用jetPEI^®-HUVEC，專為該細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染設(shè)計(jì)的特異性轉(zhuǎn)染試劑?？梢杂?/span>jetOPTIMUS替代。

原代神經(jīng)元問題：

Q：對(duì)于原代培養(yǎng)的神經(jīng)元，可以使用jetPRIME^®嗎？

A：神經(jīng)元很難轉(zhuǎn)染，主要是因?yàn)槠湓谂囵B(yǎng)的過程中不分裂。然而，jetPEI^®已被成功用于神經(jīng)元的體外轉(zhuǎn)染。

巨噬細(xì)胞問題：

Q：對(duì)于DNA轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞，jetPRIME的轉(zhuǎn)染效率如何?

A：jetPRIME已成功用于Raw264.7的轉(zhuǎn)染。按照standard condition,可以獲得50%的轉(zhuǎn)染效率；對(duì)于原代巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染，應(yīng)選擇jetPEI-macrophage。可以用jetOPTIMUS替代

質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染問題：

Q：當(dāng)我想在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染時(shí)，我該如何操作？

A：對(duì)于多個(gè)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染，每孔DNA的總量不應(yīng)超過說明書中標(biāo)明的DNA量。每個(gè)質(zhì)粒的比例根據(jù)質(zhì)粒的大小、結(jié)構(gòu)和期望的每個(gè)質(zhì)粒的表達(dá)水平來應(yīng)用。在每孔中，每個(gè)質(zhì)粒至少應(yīng)占總DNA量的10%。

復(fù)合物問題：

Q：jetPRIME^®/DNA復(fù)合物可以穩(wěn)定多長(zhǎng)時(shí)間？

A：復(fù)合物形成的15-30分鐘內(nèi)是獲得最佳轉(zhuǎn)染效率的時(shí)間。因此，對(duì)于需要較長(zhǎng)孵育時(shí)間的高通量篩選，推薦使用jetPEI進(jìn)行HTS, 因?yàn)?/span>jetPEI^®/DNA復(fù)合物可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4小時(shí)。

病毒包裝問題：

Q：jetPRIME^®是否適用于病毒包裝？

A：jetPRIME^®可以用在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中進(jìn)行病毒包裝。實(shí)際上，在用于病毒包裝的常規(guī)細(xì)胞中，使用jetPRIME^®的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%，例如HEK-293及其衍生株，CHO, VERO,WOP和BHK細(xì)胞，因此會(huì)產(chǎn)生高病毒滴度（Dewannieux,M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011).The mouseIAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the fiveGPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002）.

細(xì)胞活性問題：

Q：如何提高脆弱細(xì)胞的細(xì)胞活性（例如，原代成纖維細(xì)胞）？

A：轉(zhuǎn)染對(duì)于細(xì)胞來說是創(chuàng)傷事件。改進(jìn)細(xì)胞活性，可參考以下建議：

-轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基

-減少DNA的量

-減少jetPRIME^®的體積

-在含血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染

-轉(zhuǎn)染后24小時(shí)分析轉(zhuǎn)染效率而不是48小時(shí)

-確保使用jetPRIME^® buffer稀釋jetPRIME和DNA

-檢測(cè)質(zhì)粒不含內(nèi)毒素

質(zhì)粒大小問題：

Q：使用jetPRIME^®做DNA轉(zhuǎn)染會(huì)有質(zhì)粒大小的限制嗎？

A：使用jetPRIME^®做DNA轉(zhuǎn)染沒有質(zhì)粒大小的限制。然而，記住同樣的DNA量，大質(zhì)粒的基因拷貝數(shù)比小質(zhì)粒少。

siRNA問題:

Q：可以使用jetPRIME^®轉(zhuǎn)染siRNA嗎？

A：jetPRIME^®完quan可以用于siRNA轉(zhuǎn)染，使用終濃度10-50nm的siRNA。然而，如果您主要感興趣的是siRNA轉(zhuǎn)染，那么試劑INTERFERin^®是您的選擇。

保存問題：

Q：jetPRIME^®如何保存？

A：jetPRIME^®是穩(wěn)定的分子。室溫運(yùn)輸jetPRIME^®和它的buffer，為長(zhǎng)期保存，應(yīng)儲(chǔ)存在4°C。

加熱問題：

Q：當(dāng)我收到jetPRIME^®試劑時(shí)，管子完quan是溫的。它是否仍然有效，能否繼續(xù)使用？

A：jetPRIME^®是非常穩(wěn)定的分子。已經(jīng)做了測(cè)試jetPRIME試劑穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)。jetPRIME^®在50°C放置48小時(shí)后，仍表現(xiàn)出和保存在4°C時(shí)相似的轉(zhuǎn)染效率。

冷凍問題：

Q：我不小心凍存了我的jetPRIME^®試劑，我該怎么辦？

A：jetPRIME^®可以耐受偶爾的冷凍，而不影響轉(zhuǎn)染效率。然而，對(duì)于長(zhǎng)期保存來說，建議分裝并儲(chǔ)存在4°C，以確保試劑長(zhǎng)時(shí)間有效。

有效期問題：

保存適當(dāng)時(shí)，jetPRIME^®cat#114-01 (0.1mL)可以保存6個(gè)月。其他規(guī)格的jetPRIME^®至少可以保存1年。

參考文獻(xiàn)問題：

Q：我在哪里可以找到科研人員已成功使用jetPRIME^®發(fā)表的文章？

A：在Polyplusproduct citation database,可以找到引用jetPRIME和Polyplus-transfection公司其他試劑的科研論文。

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